The clinical diagnosis of cytomegalovirus (CMV) eye pathology in children needs laboratory confirmation. The disadvantages of determining antibodies to CMV in serum in enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) include the presence of false positive and false negative results.
AIM: To determine the features of the synthesis of antibodies to the proteins of the tegument pp65, pp150, pp28 and the DNA-binding protein pp52 of cytomegalovirus, as well as to compare the diagnostic effectiveness of two laboratory methods of serodiagnostics of CMVI in children with uveitis and keratitis of different genesis: enzyme immunoassay and linear immunolysis.
MATERIAL AND METHODS: A total of 30 children (age 5–16 years) with uveitis (n=14) and keratitis (n=16) were included in the study. The IgM and IgG antibodies to the immediate early (IE) and late antigens of the virus (serological markers of primary, chronic, and reactivation of chronic infection) were determined in the ELISA. The IgG antibodies to individual recombinant CMV antigens containing only immunodominant protein fragments of viral antigens were studied in the line immunoassay (LIA): the main nonstructural IE protein, DNA-binding phosphoprotein p52, and phosphoproteins of the tegument p150, p65, and p28. The results of LIA were evaluated visually.
RESULTS: CMV infection (CMVI) in children with uveitis in ELISA was almost 2 times higher than that with keratitis (10/14%–71% vs. 6/16%–37.5%, p >0.05). Of the four positive results for detection of antibodies to IE antigen in ELISA, one was confirmed in LIA. In general, the discrepancy between the results of the determination of IgG antibodies to IE antigen in ELISA and LIA was noted in 13% of serum samples. LIA showed the increased frequency (p >0.05) and intensity (p <0.05) of antibody formation to viral antigens p65 and p52 in uveitis compared with keratitis, which confirmed the important role of CMVI in the pathogenesis of uveitis.
CONCLUSION: Both methods revealed a higher level of CMVI in children with uveitis than those with keratitis. IgG antibodies to IE-antigen serological markers of the reactivation of chronic CMVI have clinical importance because they serve as the basis for the appointment of antiviral therapy. Discrepancies between the results of ELISA and LIA in the detection of antibodies to IE antigen indicate the expediency of confirming the results of ELISA in LIA.
Thus, laboratory examination of sera in ELISA with subsequent analysis of antibodies to individual recombinant CMV antigens in LIA is an effective, highly sensitive, and highly specific method to verify CMVI and determine its activity. The most informative action is the determination of IgG antibodies to recombinant CMV antigens: IE antigens, p65, and p52.
Клинический диагноз цитомегаловирусной патологии глаз у детей нуждается в лабораторном подтверждении. Недостатки определения антител к цитомегаловирусу (ЦМВ) в сыворотке в иммуноферментном анализе (ИФА) — наличие ложноположительных и ложноотрицательных результатов.
Цель. Определить особенности синтеза антител к белкам тегумента рр65, рр150, рр28 и ДНК-связывающему белку рр52 цитомегаловируса, а также сопоставить диагностическую эффективность двух лабораторных методов серодиагностики ЦМВИ у детей с увеитами и кератитами разного генеза: иммуноферментного анализа и линейного иммуноанализа.
Материал и методы. Обследовано 30 детей (возраст 5–16 лет) с увеитами (n=14) и кератитами (n=6). В иммуноферментном анализе определяли IgM-, IgG-антитела к поздним антигенам ЦМВ, маркёрам первичной и хронической цитомегаловирусной инфекции (ЦМВИ), а также IgG-антитела к предраннему антигену–маркёру реактивации хронической ЦМВИ. В линейном иммуноанализе (ЛИА) исследовали IgG-антитела к индивидуальным рекомбинантным антигенам ЦМВ, содержащим только иммунодоминантные белковые фрагменты вирусных антигенов: основного неструктурного предраннего белка IE, ДНК-связывающего фосфопротеина p52, фосфопротеинов тегумента р150, р65, р28p. Результаты ЛИА оценивали визуально.
Результаты. Инфицированность ЦМВ детей с увеитами в ИФА почти в 2 раза выше, чем с кератитами (10/14–71% vs 6/16–37,5%). Из четырёх положительных результатов выявления антител к IE-антигену в ИФА в ЛИА подтвердился только один. В целом, несовпадение результатов определения IgG-антител к IE-антигену при ИФА и ЛИА отмечено в 13% образцов сывороток. В случае ЛИА у детей с увеитами частота (р >0.05) и интенсивность (р <0.05) антителообразования к вирусным антигенам р65 и р52 была выше, чем у пациентов с кератитами.
Заключение. Оба метода обнаружили более высокую инфицированность ЦМВ детей с увеитами, чем с кератитами, что подтверждает важную роль ЦМВИ в патогенезе увеитов. IgG-антитела к IE-антигену — серологические маркёры реактивации хронической ЦМВИ — имеют важное клиническое значение, так как служат основанием для назначения противовирусной терапии. Расхождения результатов при использовании ИФА и ЛИА в детекции антител к IE-антигену указывают на целесообразность подтверждения данных ИФА в ЛИА.
Таким образом, лабораторное исследование сывороток в ИФА с последующим анализом антител к индивидуальным рекомбинантным антигенам ЦМВ в ЛИА представляет собой эффективный высокочувствительный и высокоспецифичный способ верификации ЦМВ-инфекции и определения её активности. Наиболее информативно определение IgG-антител к рекомбинантным антигенам ЦМВ: IE, р65 и р52.